病毒載體系列丨腺相關病毒(AAV)載體

 

腺相關病毒AAV有表達滴度高、宿主免疫反應輕微、感染譜廣、安全性高等優勢,成爲近年來在基因治療領域應用廣泛的病毒載體之一西美傑代理Cell Biolabs AAV Helper Free Expression System)的AAV三質粒表達系統是目前常用的一類AAV載體系統

https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/VPK-402%20Fig%201_0.jpg

圖所示,該套AAV系統包含表達載體(Expression vector)、包裝質粒Rep-Cap plasmid)和輔助質粒pHelper plasmid)。其中表達載體是AAV病毒的核心,包含了ITR序列、CMV啓動子、多克隆位點等,用于攜帶外源基因;包裝質粒负责表達AAV病毒的結構蛋白,決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是複制缺陷型的,必須依賴輔助病毒(如腺病毒)才可以感染靶細胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質粒上提供这些必要的辅助基因来确保重組AAV病毒具有感染性,消除AAV對輔助病毒的依賴解決了AAV生産過程中要去除腺病毒汙染難題



?      Expression vector包含ITR序列,多克隆位點,攜帶目的基因;

?      Rep-Cap plasmid包含RepCap基因,決定了重組AAV的血清型和組織嗜性;

?      pHelper plasmid 包含腺病毒的VAE2AE4基因,使重組AAV具有感染性。

  1. AAV表達載體

AAV基因組爲4.7kb,能够攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8AAV的表達載體,兼容常用的各種AAV包裝系統表達載體都攜帶有2ITR序列,使AAV基因組能正確形成T-形二級結構,進而保證了病毒的有效複制和包裝。載體上有氨苄抗性基因、多克隆位點,还可以根據實驗需要選擇帶標簽、無標簽、不含啓動子或自身互補型self-complementaryAAV表達載體(産品詳情如下表)

貨號

質粒名称

載體容量(kb

特征

VPK-415

pAAV-IRES-Puro

1.8

Puro標簽

VPK-416

pAAV-IRES-Neo

1.6

Neo標簽

VPK-417

pAAV-IRES-Hygro

1.4

Hygro標簽

VPK-418

pAAV-IRES-GFP

1.7

GFP標簽

VPK-419

pAAV-IRES-Bsd

2

BSD標簽

VPK-410

pAAV-MCS

3

無標簽

VPK-411

pAAV-MCS Promoterless

4

啓動子

VPK-430

pscAAV-MCS

1.5

self-complementary

 

 

  1. AAV包裝質粒

AAV共有12個血清型,其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得,並且具有明確的的抗體反應性,是目前常用的經典AAV載體。尽管不同血清型AAV都具有正二十面體結構,但其衣殼蛋白在序列與空間構象上的多樣性,使得AAV與不同細胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面,AAV-2的感染譜較廣應用AAV-1在骨骼肌中的转导效率較高,AAV-3易于轉導巨核細胞,AAV-5AAV-6感染呼吸道上皮细胞的优势較为显著。因此,根據AAV不同血清型在組織感染性的相對特異性,可以用于在針對不同靶向組織的基因治療中尋求最佳的AAV載體类型與组合。除了常见的六個血清型AAV之外,Cell Biolabs还提供两種重組型AAV包裝質粒AAV-DJAAV-DJ-8,如下图所示,这两種AAVRep-Cap基因是由多個野生型AAV的结构基因重組而来,與其他野生型相比AAV-DJ在體外細胞轉導效率更高,AAV-DJ-8則更適用于体内感染實驗

常用的AAV-2爲參照,下表比較不同血清型AAV对種属、组织细胞的感染率。值得一提的是,AAV-DJ对不同物種的肝细胞、黑色素瘤细胞以及胚胎干细胞的感染能力都有绝对优势,甚至高于常用的AAV-2

辅助質粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質粒pHelper載體中包含了腺病毒的E2AE4基因VA RNA,由于我們常用的AAV包裝細胞系293293T含有E1基因因此該系統中的pHelper質粒上沒有再提供E1基因。

AAV包裝質粒貨號Rep-Cap&pHelper plasmids

VPK-401

VPK-402

VPK-403

VPK-404

VPK-405

VPK-406

VPK-400-DJ

VPK-400-DJ-8

細胞系

組織類型

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

人肝髒

13

100

2.5

0.0

0.1

10

500

0.2

HEK293

人腎髒

25

100

2.5

0.1

0.1

5

500

0.3

HeLa

人子宮

3

100

2.0

0.1

6.7

1

667

0.2

HepG2

人肝髒

3

100

16.7

0.3

1.7

5

1250

0.5

Hep1A

小鼠肝髒

20

100

0.2

1.0

0.1

1

400

0.1

911

人視網膜

17

100

11

0.2

0.1

17

500

0.0

CHO

倉鼠卵巢

100

100

14

1.4

333

50

25000

5.0

COS

非洲綠猴腎髒

33

100

33

3.3

5.0

14

500

0.3

MeWo

人皮膚

10

100

20

0.3

6.7

10

2857

1.0

NIH3T3

小鼠成纖維

10

100

2.9

2.9

0.3

10

500

0.1

A549

人肺髒

14

100

20

ND

0.5

10

1000

0.1

HT1180

人成纖維

20

100

10

0.1

0.3

33

333

0.2

Monocytes

人原代單核細胞

1111

100

ND

ND

125

1429

100

ND

Immature DC

人樹突細胞

2500

100

ND

ND

222

2857

200

ND

Mature DC

人樹突細胞

2222

100

ND

ND

333

3333

100

ND

ND = Not Determined


 

西美傑代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統外,还有腺病毒(Adenovirus),慢病毒(Lentivirus)和逆轉錄病毒(Retrovirus)載體系統,为广大科研用户提供了高效、便捷的病毒載體产品库,小编之后还会一一为大家介绍这些病毒載體,敬请期待!

北京西美傑科技有限公司作爲Cell Biolabs中國區代理,始終秉承著專業、嚴謹的態度爲广大生物科技领域科研與企业客户提供高品質产品與優質服務,如果您對上述産品感興趣,歡迎隨時撥打全國客服熱400-050-4006或登錄西美傑官方網站www.xmjsci.com查詢訂購!

 

 

在線客服

我們的營業時間: 8:30-17:30

  •   北京客服1
  •   北京客服2
  •   上海客服
  •   成都客服
  •   廣州客服